體外診斷試劑性能評估
--靈敏度
靈敏度評估資料是評價擬上市產(chǎn)品有效性的重要依據(jù)，也是產(chǎn)品注冊所需的重要申報材料之一。
靈敏度的定義可以理解為體外診斷試劑對待測樣本所能檢測到的最小量，有兩個含義：①最小濃度或含量的變化可以引起檢測信號的顯著變化；②具有適當(dāng)?shù)南薅葯z測出區(qū)別于零的待測物的最小濃度或含量。
分析靈敏度與功能靈敏度
分析靈敏度
體外診斷試劑的分析靈敏度也稱為檢測限，指檢測方法可檢測到的最低檢測濃度，即在統(tǒng)計學(xué)意義上能與零劑量區(qū)別的量。
一般用95％可信限計算：重復(fù)測定空白樣本20次，計算20次反應(yīng)測得的均值（
）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD），以+2SD（夾心法）或-2SD（競爭法）計算出相應(yīng)的濃度，即為體外診斷試劑的分析靈敏度，也是注冊資料所需提供的內(nèi)容。
）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD），以+2SD（夾心法）或-2SD（競爭法）計算出相應(yīng)的濃度，即為體外診斷試劑的分析靈敏度，也是注冊資料所需提供的內(nèi)容。分析靈敏度評估的具體方法，如下：
1.分析靈敏度評估需要的材料和基本要求
空白樣本的制備：空白樣本應(yīng)不含被測物，但其基質(zhì)應(yīng)與帶測定常規(guī)樣本相同。如空白樣本難以獲得，可采用5%牛血清或人血清白蛋白溶液，或根據(jù)具體項目選擇相應(yīng)基質(zhì)的樣本，但是需要注意的是，要將基質(zhì)效應(yīng)減到最小。
2.實驗方法
在一次運行中重復(fù)測定空白樣本20次。
3.數(shù)據(jù)處理
（1）數(shù)據(jù)記錄：將結(jié)果記錄于表格。如果檢測系統(tǒng)對于低于零的報告為零，應(yīng)記錄初始響應(yīng)值。
（2）數(shù)據(jù)統(tǒng)計：計算20次平均值和標(biāo)準(zhǔn)差SD
和標(biāo)準(zhǔn)差SD標(biāo)準(zhǔn)差計算公式：
4.結(jié)果報告
分析靈敏度=+2SD （夾心法）或-2SD（競爭法）
+2SD （夾心法）或-2SD（競爭法）功能靈敏度
體外診斷試劑的功能靈敏度與精密度相關(guān)，是以天間變異系數(shù)（CV）為20%時所對應(yīng)的檢測限樣本具有的平均濃度。
計算方法為：將低值樣本倍比稀釋后重復(fù)測定10次以上，計算每個低值樣本檢測信號的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)（CV），選擇CV大于 20％時所對應(yīng)的低值樣本平均濃度，這就是體外診斷試劑的功能靈敏度。
天間精密度估計值的計算公式，如下：
求出均值：
計算標(biāo)準(zhǔn)差
計算變異系數(shù)
n為累計實驗的天數(shù)
如何提高體外診斷試劑的靈敏度？
影響靈敏度的因素
（1）抗原和抗體的親和性：兩者的親和性越高，靈敏度越高。
（2）抗體的標(biāo)記方法：標(biāo)記信號物的放大效應(yīng)可以提高靈敏度，如化學(xué)發(fā)光、膠體金、膠乳標(biāo)記等。
（3）抗原抗體反應(yīng)時間：反應(yīng)時間的適當(dāng)延長，可以使抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)達到反應(yīng)平衡，進而靈敏度也提高了。如在化學(xué)發(fā)光免疫診斷試劑中，抗原與抗體在液相中充分混合至少反應(yīng)10分鐘以上，有時還需要震蕩反應(yīng)以提高反應(yīng)速率，這樣比較容易獲得較高靈敏度。
（4）包被抗體與標(biāo)記物的量：在達到反應(yīng)平衡的條件下，可以適當(dāng)增加包被抗體和標(biāo)記物的濃度，來提高靈敏度。如NC膜上的包被抗體、膠體金標(biāo)記抗體，微球標(biāo)記的抗體等。但NC膜的抗體吸附量有限，可以通過優(yōu)化標(biāo)記來提高靈敏度。微球是以公家偶聯(lián)的方式與抗體結(jié)合，其靈敏度較高于膠體金。
提高靈敏度的方法
（1）選擇靈敏度更高的表標(biāo)記材料
膠體金是常用的標(biāo)記物，但由于其具有較低的發(fā)光強度及較少的抗體吸附量，限制了膠體金免疫層析方法的靈敏度。而與抗體共價結(jié)合的材料，如鑭系元素，量子點，吖啶酯，膠乳微球等，有利于提高體外診斷試劑靈敏度。
（2）發(fā)展信號放大系統(tǒng)
免疫層析技術(shù)靈敏度不高的原因主要是T、C線位置標(biāo)記物信號不強，可以根據(jù)這一不足，優(yōu)化放大系統(tǒng)的反應(yīng)條件。有研究表明，通過添加銀增敏劑到膠體金免疫層析試劑條NC膜的方法可以提高檢測靈敏度10-100倍。另外，改變膠體金顆粒的大小，也可以提高靈敏度。
（3）濃縮樣品
通過濃縮的方法增加樣品的濃度，，可以提高體外診斷試劑的靈敏度10倍左右。
（4）選擇優(yōu)質(zhì)的試紙條
如在膠體金免疫層析檢測方法中，不同的NC膜具有不同的孔徑、疏水性、親水性及其他性能的不同，會導(dǎo)致靈敏度的差異。
（5）緩沖液體系
合適的緩沖液體系可以穩(wěn)定抗原抗體的結(jié)合能力及抗干擾能力，因此，合適的緩沖液體系也可以體外診斷試劑的靈敏度。
參考文獻
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