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高保真PCR預(yù)混液(2×PCR Master Mix)

產(chǎn)品參數(shù)

抗體參數(shù)

名稱 組分 規(guī)格 貨號
高保真PCR預(yù)混液
(2×PCR Master Mix)
高保真酶、dNTP、Mg2+ 1mL M109T1
10mL
產(chǎn)品介紹

產(chǎn)品介紹

本產(chǎn)品為2×濃度的PCR混合液,其除了含有PCR擴增常用的dNTP和Mg2+之外,還含有一種基于基因工程改造的新一代高保真酶,其具有極高的擴增效率和高保真性,同時增加的特殊擴增促進劑也使擴增效果進一步增加。此酶具有 5'→3'DNA聚合酶活性以及3'→5'外切酶活性,擴增產(chǎn)物為平末端,可用于后續(xù)同源重組等試驗。

產(chǎn)品應(yīng)用

本品適用于以基因組DNA、cDNA、質(zhì)粒等模板的PCR反應(yīng)。

運輸與保存

-30°C~ -15°C保存,低溫運輸。

試驗操作

  • 反應(yīng)體系
    組分 體積(μL)
    ddH2O Up to 50
    2×PCR Master Mix 25
    模板 X
    正向引物(10 μM) 1
    反向引物(10μM) 1

    注:模板推薦量為基因組DNA:50-150ng;質(zhì)粒:5-50ng;cDNA:1-5μl(不超過反應(yīng)體積的1/10),使用前請于冰上融化,震蕩瞬時離心。

  • 反應(yīng)程序
    程序 溫度(℃) 時間 循環(huán)數(shù)
    預(yù)變性 95 3min 1
    變性 95 15s 35
    退火a 根據(jù)引物而定 15s
    延伸b 72 15s
    延伸 72 5min 1
    保存 4 1

    a.退火溫度:一般設(shè)置為引物Tm值±3℃左右即可; b. 延伸時間:一般模板設(shè)置為15s/kb,對于一些困難模板,可延伸至20-30s/kb范圍之間調(diào)整。

注意事項

1. 請使用高質(zhì)量模板。
2. 避免反復(fù)凍融此產(chǎn)品,因為這會降低酶的活性。
3. 此產(chǎn)品僅供科研使用,不適用于臨床診斷或治療。
4. 請勿將此產(chǎn)品用于任何非法目的。

常見問題及解決方法

常見問題 可能原因 解決方法
無擴增產(chǎn)物或產(chǎn)物量少 引物 重新設(shè)計優(yōu)化引物
退火溫度 設(shè)置梯度,尋找合適退火溫度
引物濃度 適當(dāng)提高引物濃度
延伸時間 適當(dāng)提高延伸時間
循環(huán)數(shù) 適當(dāng)提高循環(huán)數(shù)
模板 適當(dāng)增加模板量或提高模板純度
條帶彌散或有雜帶 引物 重新設(shè)計優(yōu)化引物或適當(dāng)降低引物濃度
退火溫度 適當(dāng)提高退火溫度并尋找最適溫度
延伸時間 根據(jù)雜帶大小而定,大于目的片段降低,小于目的片段提高延伸時間
循環(huán)數(shù) 適當(dāng)降低循環(huán)數(shù)
模板 使用純度高的模板或適當(dāng)降低模板量
產(chǎn)品數(shù)據(jù)

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